项目介绍:
免疫电镜双标是利用抗原抗体特异性结合原理,在一张超薄切片(镍网)上,用两种不同来源的特异性一抗分别与两种待检测抗原结合,然后用带有两种不同粒径胶体金标记的二抗分别与对应种属的一抗抗原复合物结合。在电子显微镜下胶体金为黑色颗粒状物质,根据胶体金颗粒大小在组织和细胞超微结构上分别定位两种抗原,实现两种蛋白于亚细胞水平(如线粒体、内质网等)的定位及空间位置关系分析。免疫电镜双抗标记,需要选用不同来源的一抗。
实验周期:
一个月。
样本准备:
样本取材可参考透射电镜全套取材要求,取样大小比普通透射电镜要求更小,需取至1*1*1mm。取下后立即投入免疫电镜专用固定液,4℃保存,4℃冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。样品固定后应尽快安排做后续包埋和免疫标记实验,减少抗原丢失的可能性。
注意事项:
1、1-3min内取样,取样至1mm3大小。取材前可提前准备装有免疫电镜固定液A液的培养皿,将小组织块离体取下后立即投入培养皿内,用手术刀在培养皿的固定液中进行切割成1mm3的小组织块。再将切割好的小组织块转移至装有新的免疫电镜固定液的EP管内继续固定。
2、取材时尽量精确到需要观察的目的部位(如观察肾小球取肾皮质;观察胰岛取胰岛丰富的胰尾;皮肤,肠胃等在固定液中易打卷的组织可将组织粘在滤纸上进行固定)。
3、取材时一定注意避免镊子挤压等机械损伤,刀片要锋利避免挫伤组织。
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