产品简介:
巴佛洛霉素A1是一种大环内酯类抗生素,来源于灰色链霉菌(Streptomyces griseus),可作为液泡型H+-ATP酶(V型;Ki:500 pM)的特异性抑制剂。
溶解性:
溶于DMSO(100μM)
激酶实验:
ATPase酶测定培养基包含6 mM MgSO4,50 mM HEPES (pH 7.4),200 mM Na2SO3 (V-ATPase 活化剂),0.5 mM 原钒酸钠(P-ATPase抑制剂),0.5 mM 叠氮化钠(F-ATPase抑制剂)和3 mM Na2ATP。该培养基(1.0 mL)加入或不加入V型ATPase抑制剂bafilomycin A1,与过滤的匀浆(0.1 mL)在23–25 °C下培养60分钟。通过加入1 mL 3%TCA停止反应。广谱测定的空白对照根据酶测定制备,除了组织样本是在酸之后加入。磷酸盐的分析通过加入2 mL正丁醇和0.2 mL 钼酸盐溶液(5 g 钼酸铵,22 mL H2SO4到100 mL)完成。涡旋15秒后,溶液用0.5 mL柠檬酸盐溶液(100 g/500 mL,pH 7.0)中和,再涡旋15秒。然后将溶液离心(2000×g;3分钟)以分离出丁醇相,其吸光度在400 nm下读出。制备标准正磷酸盐(0.1 μM–2.0 μM),并以酶活性检测相同的方式处理。酶活性表示为每小时和每毫克蛋白质释放的正磷酸盐的微摩尔量。V-ATPase活性被认为是Na2SO3,原钒酸钠和叠氮化钠存在下测得的V-ATPase活性,与这些试剂和特定V-ATPases抑制剂Bafilomycin A1存在下测得的ATPase活性之间的差异。
细胞实验:
Cell lines: HeLa细胞
Concentrations: ~20 nM
Incubation Time: 20小时
Method:幽门螺旋杆菌加入HeLa细胞之前,用抑制剂处理,如下:10 mM DCCD在30℃下处理1小时;100 μM NBD-CI在30℃下处理1小时,反应用10 mM终浓度的甘氨酸阻断;275 μM NEM在30℃下处理1小时,通过加入275 mM β-巯基乙醇阻断反应;14 μM Mg-ATP在0℃下处理1小时;100 μM KNO3和14 μM Mg-ATP在30℃下处理1小时;100 μM NaCO3,pH 11在0℃下处理1小时。然后将细菌提取物加入细胞,稀释40倍,终浓度为0.65 mg/mL。对照组为HeLa细胞和未处理的细菌提取物,以及细菌提取物处理时相同环境下抑制剂Bafilomycin A1处理的细胞,稀释40倍后在相同的浓度下进行培养。分析细菌提取物的空泡活性。
动物实验:
Animal Models: 年幼的(大约9天大)莫三鼻口孵鱼,莫桑比克罗非鱼
Formulation: 包含0.05 % 二甲基亚砜(DMSO)的鱼缸水
Dosages: 10 μM
Administration: --
注意事项:
1、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2、以上信息仅做参考交流之用。
保存条件:
-20℃
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